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大鼠LSD1酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
96t
目
的:
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中 LSD1 含量。
检测范围:
5pg/ml-180pg/ml
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠 LSD1 水平。用纯化的大鼠 LSD1 抗体包被微
孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 LSD1,再与 HRP 标记的 LSD1 抗体结合,
形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化
下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的 LSD1 呈正相关。用
酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中大鼠 LSD1 浓度。试
剂盒组成:
Reagent
Quantity
酶标包被板
12well×8strips
标准品:320pg/ml
1×0.5ml
标准品稀释液
1×1.5ml
酶标试剂
1×6ml
样品稀释液
1×6ml
显色剂 A 液
1×6ml
显色剂 B 液
1×6ml
终止液
1×6ml
30 倍浓缩洗涤液
1×20ml×30flod
说明书
1
封板膜
2
密封袋
1
样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分) 。
仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,
离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次
离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程
中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右(2000-3000
转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓
度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左
右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS(PH7.4)。用液氮迅速冷冻保滁州仕诺达生物科技有限公司
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存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将
标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测, 其
余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能 马
上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤:
1. 标准品:其浓度为 320pg/ml(贮液),再准备 5 个稀释标准品的 EP 管,每个 EP 管中加 150
μL 的标准品稀释液, 如图所示依次倍比稀释成 320pg/ml,160pg/ml,80pg/ml,40pg/ml,
20pg/ml,10pg/ml,,标准品稀释液(0pg/ml)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性,每次
实验请使用新的标准品溶液
Tube
0
1
2
3
4
5
pg/ml
320pg/ml
160pg/ml
80pg/ml
40pg/ml
20pg/ml
10pg/ml
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待
测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl
(样品*终稀释度为 5 倍)
。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃
动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,
如此重复 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同 3。
8. 洗涤:操作同 5。
9. 显色:每孔先加入显色剂 A 50μl,再加入显色剂 B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显
色 15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应
在加终止液后 15 分钟以内进行。
注意事项:
1.
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后
如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间滁州仕诺达生物科技有限公司
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控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.
请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD
值大于标准品孔孔的 OD 值) ,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,
计算时请*后乘以总稀释倍数(×n×5) 。
5.
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.
底物请避光保存。
7.
严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.
所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.
本试剂不同批号组分不得混用。
计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,
在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD
值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释
倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值
代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释
倍数,即为样品的实际浓度。
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990 以上。
2.批内与批见应分别小于 9%和 11%
3.保存条件及有效期:
a.试剂盒保存:2-8℃。
b.有效期:6 个月
大鼠LSD1 elisa试剂盒@*新新闻动态
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