本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断

狗（Dog）狂犬病毒（RV）ELISA 检测试剂盒

使用说明书

检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被狂犬病毒（RV） 抗原的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用 底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的狂犬病毒（RV）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值）， 计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃ , 避免反复冻融， 在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

操作注意事项

1.  试剂盒保存在 2-8℃ , 使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这 属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.  浓度为 0 的 S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，*终结果乘以 5 才是样本实际浓度。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.  所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成

注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、7.5、15、30、60、120ng/mL

试剂的准备

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。

洗板方法

1.  手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍 干，如此洗板 5 次。

2.  自动洗板机：每孔注入洗液 350 μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

操作步骤

1.  从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50 μL；

3.  样本孔先加待测样本 10 μL，再加样本稀释液 40 μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100 μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，

如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物 A、B 各 50 μL，37℃避光孵育 15min。

7.  每孔加入终止液 50 μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

结果判断

绘制标准曲线：在 Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应 OD 值作纵坐标，绘制出 标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

试剂盒性能

1.  准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数 R 值，大于等于 0.9900。

2.  灵敏度：检测浓度小于 1.0ng/mL。

3.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.  重复性：板内、板间变异系数均小于 15%。

5.  贮藏：2-8℃ , 避光防潮保存。

6.  有效期：6 个月

免责声明

1.   试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验 者承担，本公司概不负责。

2.   严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

公司介绍：滁州仕诺达生物科技有限公司是一家以技术开发、转让、销售及咨询服务为一体的生物科技有限公司，公司主要研发销售生物试剂，为科研客户提供优质的产品和技术服务。

公司主营产品包括：标准品、染色液、elisa试剂盒、动物血制品、试剂、抑制剂、酶相关试剂以及仪器设备等

代理品牌：Thermo Fisher Scientific、CST、abcam、santa cruz、sigma、Corning、Axygen、NEB、Novus、BD、R&D、阿拉丁（未提及品牌，本公司也可以代买）

合作单位：中国人民解放军军事医学研究院、北京中医药大学、上海中医药大学、江西中医药大学、广州中医药大学、河海大学、北京脑研究中心等等

售后服务：公司以“产品质量，服务至上”为企业宗旨，秉承友好共赢的合作理念，立志于为科研界老师提供我们力所能及的帮助。
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