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NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH）测试盒
点击次数：167发布时间：2019/12/11 10:49:16
更新日期：2024/8/8 17:56:42
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
紫外分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
MDH （EC 1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中 MDH 是 TCA循环的关键酶，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中 MDH 催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物， 连接多条重要的代谢途径。因此，MDH 在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性，MDH 分为 NAD-依赖的 MDH 和 NADP-依赖MDH， NADP-MDH 主要存在于真核细胞中。
测定原理：
NADP-MDH 催化 NADPH 还原草酰乙酸生成苹果酸，导致 340nm 处光吸收下降。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL 石英比色皿和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一、提取液 60 mL×1 瓶，在 4℃保存；
试剂二、液体 50 mL×1 瓶，在 4℃保存；
试剂三、粉剂×2 支，-20℃保存；临用前加入 300μL 蒸馏水，现配现用；
试剂四、粉剂×2 支，-20℃保存；临用前加入 300μL 蒸馏水，现配现用。
样本测定的准备：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、 将试剂二在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。
3、 操作表：
| 试剂名称（μL） | 测定孔 |
| 样本 | 20 |
| 试剂二 | 760 |
| 试剂三 | 10 |
| 试剂四 | 10 |
将上述试剂按顺序加入1 mL石英比色皿中，混匀后立即在 340 nm 波长下记录初始吸光度A1 和反应 1min 后的吸光度 A2，计算 ΔA=A1-A2。
注意：若 A1-A2 大于 0.5，需将样本用提取液稀释，使 A1-A2 小于 0.5，可提高检测灵敏度。
计算公式中乘以相应稀释倍数。
