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微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
S-UE能够水解尿素,产生氨和碳酸。土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关。土壤脲酶活性反应了土壤的氮素状况。
测定原理:
利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:甲苯 2mL×1 瓶,4℃保存;(自备)
试剂二:粉剂×1 瓶,临用前加入9mL蒸馏水,充分溶解待用,4℃保存;用不完的试剂 4℃保存;
试剂三:液体 19mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四 A 液:液体×1 支,4℃保存;
试剂四 B 液:液体×1 瓶,4℃保存;临用前将 A 液倒入 B 液中混合,待用;用不完的试剂 4℃保存一周;
试剂五:液体 2mL×1 瓶,4℃保存;
测定步骤:
1、 培养
| 测定管 | 对照管 |
风干土样(g) | 0.05 | 0.05 |
试剂一(μL) | 20 | 20 |
振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置 15min | ||
试剂二(μL) | 90 |
|
蒸馏水(μL) |
| 90 |
试剂三(μL) | 190 | 190 |
混匀,放入 37℃水浴培养 24h 后,10000g 25℃离心 10min,取上清液。
2、将培养结束的上清液稀释10倍(取0.1mL上清液,加入0.9mL蒸馏水)。
3、测氨量(在微量石英比色皿或96孔板中加入下列试剂)
| 测定管 | 对照管 |
稀释后的上清液(μL) | 80 | 80 |
试剂四(μL) | 15 | 15 |
试剂五(μL) | 15 | 15 |
充分混匀,室温放置 20min | ||
蒸馏水(μL) | 90 | 90 |
混匀,于578nm处,蒸馏水调零,读吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。