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可见分光光度法
正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
S-β-GC 能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。
测定原理:
S-β-GC 能够催化对-硝基苯-β-D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有特征光吸收。
自备用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:甲苯 5mL×1 瓶,4℃保存;(自备)
试剂二:粉剂×2 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 10mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂三:液体 25mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
测定步骤:
试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
风干土样(g) | 0.05 | 0.05 |
试剂一(μL) | 25 | 25 |
振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置 15min | ||
试剂二(μL) | 400 |
|
试剂三(μL) | 500 | 500 |
混匀, 37℃水浴 1h 后,立即 95℃水浴 5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却 | ||
试剂二(μL) |
| 400 |
充分混匀,10000g 25℃离心 10min,取上清液 | ||
上清液(μL) | 500 | 500 |
试剂四(μL) | 1000 | 1000 |
充分混匀,室温静置 2min 后,400nm 处蒸馏水调零,测定吸光值 A,计算 ΔA=A 测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。