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微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
磷是植物必需大量元素。植物主要通过根系从土壤中获取磷元素。土壤磷包括有机磷和无机磷。土壤有机磷经过矿化分解而转化为无机磷，才能进一步被植物吸收利用。
测定原理：
从土壤中提取无机磷，在酸性环境中，通过钼蓝法定磷，即可计算出无机磷含量。
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、可调式水浴锅，分析天平、可调式移液器、蒸馏水和 100 目筛子。
试剂组成和配制：
提取液：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。 临用前配制，加入8mL蒸馏水，充分溶解后加入4mL试剂二，混匀。
标准品：液体×1 支，20μmol/L 无机磷标准液，4℃保存。
土壤无机磷提取：
取10mL离心管，加入精确称取的100目筛子过筛的风干土样约0.01g，加入1mL提取液，震荡混匀，然后置于40℃水浴浸提1h，8000g，25℃，离心10min，取上清液，待测。
测定步骤：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。
2. 打开水浴锅，调节温度到40℃。
3. 空白管：取EP管，依次加入100μL蒸馏水，100μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10min 后于660nm测定吸光度，记为A空白管。
4. 标准管：取EP管，依次加入10μL标准液，90μL蒸馏水，100μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10min后于660nm测定吸光度，记为A标准管。
5. 测定管：取EP管，依次加入10μL上清液，90μL蒸馏水，100μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10min后于660nm测定吸光度，记为A测定管。
需在 40min 内完成比色。
注意：空白管和标准管只需测定一次。
