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(Solid-Nitrite reductase,S-NiR)试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
土壤亚硝酸还原酶是反硝化作用中的关键酶,参与亚硝酸盐至 NO 的还原反应,它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率,为氮素转化规律的研究提供一定的依据。
测定原理
亚硝酸还原酶可将NO2-还原为 NO,使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2-减少,即 540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。
需自备的仪器和用品
天平、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1mL 玻璃比色皿。
试剂的组成和配制
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加 10mL 蒸馏水溶解。
试剂三:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
试剂四:液体 25mL×1 瓶,4℃避光保存。(使用前50℃加热溶解)
试剂五:液体 25mL×1 瓶,4℃避光保存。
工作液:临用前根据用量将试剂四和试剂五以 1:1 的比例混合。
测定操作表
土样自然风干或35℃烘干
| 空白管 | 对照管 | 测定管 |
风干土样(g) |
| 0.1 | 0.1 |
蒸馏水(μL) |
| 200 |
|
试剂一(μL) | 200 |
| 200 |
试剂二(μL) | 200 | 200 | 200 |
混匀后,25℃反应 1h | |||
试剂三(μL) | 200 | 200 | 200 |
充分震荡 30S,10000rpm,4℃,离心 10min | |||
上清液(μL) | 500 | 500 | 500 |
工作液(μL) | 1000 | 1000 | 1000 |
充分混匀,室温静置显色10min,用蒸馏水调零,于1mL玻璃比色皿中测定540nm各管吸光值,分别记为 A 空白管、A 对照管、A 测定管。 |