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可见分光光度法
注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
钾保持机体的正常渗透压及酸碱平衡,参与糖及蛋白代谢,保证神经肌肉的正常功能。血清钾高于 5.5mmol/L时称高血钾,高血钾可使神经、肌肉应激性增高,使心肌应激性降低,导致心动过缓,血清钾超过10毫摩尔/升时,可发生心室纤颤,甚至心脏在舒张期停跳。血清钾低于3.5mmol/L时称低血钾,低血钾可引起肌无力甚至肌肉弛缓性麻痹,引起心肌应激性增高,出现心动过速、心律紊乱甚至在收缩期停跳。因此,血清钾是常用的生化测定指标。
测定原理:
血清中钾离子与四苯硼钠作用,形成不溶于水的四苯硼钾,产生的浊度在一定范围内与钾离子浓度成正比。通过测定其浊度来测定测定血清钾含量。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、离心机、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配置:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。
液体一:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前配制,取液体一,全部加入到试剂二瓶中,混匀。
试剂三:液体×1 瓶,4℃保存。
标准液:液体×1 瓶,2 mmol/L 钾标准液,4℃保存。
测定操作:
1.分光光度计预热30min,调节波长到520nm,蒸馏水调零。
2.试剂三置于25℃水浴中预热30min。
3.血清预处理:取EP管,依次加入50μL血清,450μL试剂一,充分混匀后室温(25℃左右),8000rpm,离心10min,取上清液,待测。
4.空白管:取1mL玻璃比色皿,依次加入200μL蒸馏水,100μL试剂二,混匀后静置5 min,再加入700μL试剂三,混匀后于520nm测定吸光度,记为A空白管。
5.标准管:取1mL玻璃比色皿,依次加入200μL标准液,100μL试剂二,混匀后静置5 min,再加入700μL试剂三,混匀后于520nm测定吸光度,记为A标准管。
6.测定管:取 1mL 玻璃比色皿,依次加入200μL上清液,100μL试剂二,混匀后静置5 min,再加入700μL试剂三,混匀后于520nm测定吸光度,记为A测定管。
注意:空白管和标准管只需测定一次。