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微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
血钙几乎全部存在于血浆中，所以血钙主要指血浆钙。血浆钙有离子钙和结合钙两种形式，
其中只有离子钙直接起生理作用，它与结合钙处于动态平衡，并受血液 pH 的影响。血钙水
平与多种重要的生理功能相关，过高或过低都会影响正常生理功能。本试剂盒用于检测血液
中游离钙浓度。
测定原理：
在强碱溶液中游离钙与 GBHA 反应生成红色钙-GBHA 复合物，在 520nm 有吸收峰；通过测定 520nm 吸光度，计算游离钙浓度。
自备仪器和用品：
可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、石英比色皿/96 孔板、无水甲醇、丙酮和蒸馏水。
试剂组成和配置：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体×1 瓶（空瓶，试剂自备）。取10 mL试剂瓶。依次加入9 mL无水甲醇和1mL丙酮，盖紧混匀即可。
标准液：液体×1 瓶，3μmol/mL，4℃保存。
血钙浓度测定操作：
1. 分光光度计预热30min以上，调节波长到520nm，蒸馏水调零。
2. 空白管：取石英比色皿/96孔板，依次加入蒸馏水12μL，试剂一50μL，混匀；再加入试剂二50μL，混匀；*后加入试剂三100μL，混匀；静置5min后于520nm测定吸光度A空白管。做一个空白管即可。
3. 标准管：取石英比色皿/96孔板，依次加入标准液12μL，试剂一50μL，混匀；再加入试剂二50μL，混匀；*后加入试剂三100μL，混匀；静置5min后于520nm测定吸光度A标准管。做一个标准管即可。
4. 测定管：取石英比色皿/96孔板，依次加入血液样品12μL，试剂一50μL，混匀；再加入试剂二50μL，混匀；*后加入试剂三100μL，混匀；静置5min后于520nm测定吸光度A测定管。记为 A 测定管。
注意：空白管和标准管只需测定一次，做三次重复。
