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可见分光光度法
产品内容:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前配制,依次加入22 mL蒸馏水充分溶解,再加入试剂二,充分混合。
标准液:液体×1 支,0.02 mmol/L无机磷,4℃保存。
产品说明:
血磷主要指血中的无机磷盐以无机磷盐的形式存在。血浆中钙、磷浓度关系密切。在以mg/dL表示时,两者的乘积([Ca]×[P])为30~40。当([Ca]×[P])>40,则钙和磷以骨盐形式沉积于骨组织。若([Ca]×[P])<35 则妨碍骨的钙化,甚至可使骨盐溶解,影响成骨作用。血钙和血磷含量的相对稳定依赖于钙、磷的吸收与排泄和钙化及脱钙两种代谢的相对平衡。上述平衡受到维生素D3、甲状旁腺素和降钙素等激素的调节。
去除血清中有机磷后,无机磷盐与钼酸铵试剂生成磷钼酸,被硫酸亚铁还原后呈蓝色。在620nm 有光吸收;通过测定620 nm吸光度,计算血液中磷含量。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、离心机、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
操作步骤:
一、血磷浓度测定操作:
1. 分光光度计预热30min以上,调节波长到620 nm,蒸馏水调零。
2. 取出标准液,室温解冻。
3. 血清预处理:吸取50 μL血清,加950μL试剂一,混匀后室温8000rpm,离心10min,取上清液,待测。
4. 空白管:取1mL玻璃比色皿,依次加入250μL 蒸馏水,250μL试剂一,500μL试剂三,混匀后静置10min,于620 nm 测定吸光度记为A空白管。
5. 标准管:取1mL玻璃比色皿,依次加入250μL 标准液,250μL试剂一,500μL试剂三,混匀后静置10min,于620 nm 测定吸光度记为A标准管。
6. 测定管:取1mL玻璃比色皿,依次加入250μL 上清液,250μL试剂一,500μL试剂三,混匀后静置10min,于620 nm 测定吸光度记为A测定管。