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可见分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
哺乳动物血液中的葡萄糖称为血糖,是其体内糖的主要运输形式。血糖浓度受神经系统和激素的调节而保持相对稳定,调节失衡时出现高血糖和低血糖。糖尿病、颅内压增加和脱水症
等均可引起高血糖;饭后,精神紧张也可出现生理性高血糖。相反,胰岛 β 细胞增生或肿癌
等,垂体、肾上腺皮质和甲状腺功能减退,以及严重肝病患者均可出现低血糖症状。此外,饥饿和剧烈运动可引起暂时的低血糖。
测定原理:
葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢;过氧化物酶催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在 505nm 有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:0.5mmol/L 葡萄糖溶液 10mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 25ml×1 瓶,4℃保存;
试剂三:液体 25ml×1 瓶,4℃保存;
测定步骤
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 505nm,蒸馏水调零。
2、混合试剂的配制:使用前将试剂二和试剂三 1:1 等体积混合,用多少配多少。
3、加样表(在 EP 管中加入下列试剂) :
试剂名称(μL) | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
血清 |
|
| 100 |
试剂一 |
| 100 |
|
蒸馏水 | 100 |
|
|
混合试剂 | 900 | 900 | 900 |
混匀,置 37℃水浴中,保温 15min,于 505nm 波长处读取吸光度 A。空白管、标准管和测定管吸光值分别记为 A1、A2 和 A3。空白管和标准管只要做一管。