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可见分光光度法
产品内容:
提取液:液体50ml×1瓶,4℃保存;
试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存;
产品简介:
海藻糖存在于大量有机体中,包括细菌、藻类、酵母、植物、昆虫和其他无脊椎动物。由于海藻糖具有独特的不同于其他碳水化合物的生物学特性,能在干旱、高温、脱水、冷冻、高渗透压及毒性物质等恶劣环境下保护生物体细胞蛋白质、脂肪、糖类、核酸等组分不受损害。
测定方法采用蒽酮比色法。具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样品的测定等优点。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿﹑研钵、浓硫酸和蒸馏水。
操作步骤:
一、海藻糖提取:
1、 细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1ML提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次),室温静置45min,振荡3~5次,冷却后,8000g,常温离心,取上清。
2、 组织的处理:称取约0.1g样本,常温研碎,加入1mL提取液,室温静置45min,振荡3~5次,冷却后,8000g,常温离心,取上清。
3、 血清(浆)的处理:吸取约100μL血清(浆),加入1mL提取液,室温静置45min,振荡3~5次,冷却后,8000g,常温离心,取上清。
二、测定操作表:
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至620nm,蒸馏水调零。
2、 调节水浴锅至95度。
3、 工作液的配制:临用前在每瓶试剂一中加入7.5mL蒸馏水后,缓慢加入42.5mL浓硫酸,不断搅拌,充分溶解,待用。用不完的试剂4℃保存一周。
4、 样本测定:取0.25ml样本和1ml工作液至EP管中,95度水浴10min(盖紧,防止水分散失),自然冷却至室温,请谨慎操作。
若吸光值大于1,请将样本用提取液稀释后再测定,计算公式中乘以相应的稀释倍数。