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可见分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等，是*常见的单糖和双糖，其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物，也是进一步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。
测定原理：
加热促进碱性溶液中 3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物，在540nm 有特征吸收峰；在一定的浓度范围内，还原糖含量与540nm吸光度成线性关系，根据标准曲线，即可求出样品中还原糖的量。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：20mL×1 瓶 ，4℃保存；
样品中还原糖的提取：
1、细菌或细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议1000万细菌或细胞加入2mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3S，间隔10S，重复30次），转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中40min 并且振荡8~10 次，8000g，25℃离心 10min，取上清供测定用。
2、组织的处理：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.2g
组织，加入2mL试剂一），冰浴匀浆，转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中40min 并且振荡8~10次，8000g，25℃离心10min，取上清供测定用。
3、血清（浆）的处理：按照血清（浆）体积（mL）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建
议取0.2mL血清（浆）加入2mL试剂一），冰浴匀浆，转移到有盖离心管中（防止加热时水分散失），80℃水浴中 40min 并且振荡 8~10 次，8000g，25℃离心10min，取上清供测定用。
测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2、 调节水浴锅至 95℃。
3、 在 EP 管中加入下列试剂：
| 试剂（μL） | 对照管 | 测定管 |
| 样本 | 700 | 700 |
| 试剂二 |
| 500 |
| 蒸馏水 | 500 |
|
将各管摇匀，在 95℃水浴中加热 5min（盖紧，防止水分散失），取出后立即冷却至室温，
混匀。在 540nm波长下读取对照管和测定管吸光值。计算 ΔA=A 测定-A 对照。
注意：1、每个测定管需设一个对照管。
2、如果 ΔA大于2，需要将样本用试剂一稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。
