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可见分光光度法
产品内容:
提取液:液体50mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入3mL 蒸馏水,充分溶解待用;用不完的试剂4℃保存;
试剂二:液体30mL×1 瓶,4℃保存;
产品说明:
β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中,催化β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下,可诱导细胞大量合成β-1,3-GA,因此β-1,3-GA 活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。
β-1,3-GA 水解昆布多糖,内切β-1,3-葡萄糖苷键,产生还原末端,通过测定还原糖生成速率,来计算其酶活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:
粗酶液提取:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL
提取液),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤:
1、 分光光度计预热30min 以上,调节波长至550nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定(在1.5mL EP 管中依次加入下列试剂):
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
样本 | 100 | 100 |
蒸馏水 |
| 100 |
试剂一 | 100 |
|
充分混匀,放入37℃水浴60min。 | ||
试剂二 | 600 | 600 |
充分混匀,沸水浴5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却,550nm 处记录各管吸光值A,
如果吸光值大于2,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式乘以相应稀释倍数),ΔA=A 测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。