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微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)，
以及真菌类的细胞壁中。而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的
作用，成为抗真菌病害的研究热点。
测定原理：
几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物，在585nm处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
自备实验用品及仪器
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、甲苯（土壤样品专用）和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 105mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，
加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
2. 真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心20min，取上清置于冰上待测。
3. 培养液：直接测定。
测定操作表：
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至585nm，对照管调零。
2、操作表
|
| 对照管 | 测定管 |
| 粗酶液（µL） | 80 | 80 |
| 提取液（µL） | 120 | 40 |
| 试剂一（µL） |
| 80 |
| 混匀，37℃水浴 1h，5000rpm，4℃，离心 10min，取上清。 | ||
| 试剂二（µL） | 40 | 40 |
| 混匀，沸水浴 7min | ||
| 试剂三（µL） | 40 | 40 |
| 试剂四（µL） | 80 | 80 |
| 混匀，37℃，15min，于微量石英比色皿/96 孔板，对照管调零，测定 A 585 。 | ||
