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可见分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
纤维素酶是由微生物产生的多组分的酶系，能水解纤维素β-1,4葡萄糖苷键生成葡萄糖，研究滤纸酶活力对纤维素酶的研究具有非常重要的意义。
测定原理
滤纸酶水解滤纸产生的还原糖能与3,5-二硝基水杨酸生成红棕色氨基化合物，在540nm 处有光吸收，在一定范围内反应液颜色深浅与还原糖的量成正比，可测定计算得滤纸酶的
活力。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
试剂一：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 40mL×1 瓶，4℃保存。
滤纸条：50mg×50 条。
酶液提取
1. 组织：按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL
蒸馏水）加入蒸馏水，冰浴匀浆后于4℃，12000rpm 离心10min，取上清置于冰上待测。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：蒸馏水体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，12000rpm 离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 培养液或其它液体：直接检测。
测定操作
1. 根据样本数量取两倍数量的滤纸条和Ep管，每支Ep管中放入一个卷状滤纸条（注意要放入底部），作为底物。
2. 对照管：取200μL灭活的酶液，加入500μL试剂一，充分混匀，再加入放有滤纸条的Ep管中，标注为对照管。
3. 测定管：取200μL酶液，加入500μL试剂一，充分混匀，再加入放有滤纸条的Ep管中，
标注为测定管。
4. 对照管和测定管同时置于50℃水浴锅中反应 30min。
5. 加800μL试剂二，沸水浴5min，自来水冷却后取1mL于1mL玻璃比色皿中测定540nm处吸光值，分别记为A对照管和A测定管。
