产品展示
优质供应
详细内容
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
蔗糖是植物光合作用的主要产物,也是糖分运输和储藏的主要形式。因此,测定蔗糖含量对于植物糖代谢具有重要意义。此外,蔗糖含量是饮料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等产品质
量控制的重要指标。
测定原理:
先用碱与样品共热,破坏其中的还原糖。然后在酸性条件下将蔗糖水解生成葡萄糖和果糖,
果糖进一步与间苯二酚反应,生成有色物质,在 480nm 下有特征吸收峰。
所需的仪器和用品:
可见分光光度计/微量法、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 100ml×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 2ml×1 瓶,4℃保存;
试剂三:液体 20ml×1 瓶,4℃保存;
试剂四:液体 5ml×1 瓶,4℃保存;
试剂五:粉剂 0.5g×1 瓶,常温保存。
蔗糖提取:
称取0.1~0.2g样本,常温研碎,加入0.5mL提取液,适当研磨后快速转移到离心管中,置于 80℃水浴锅中10min,振荡3~5次,冷却后,4000g,常温离心10min,取上清,加入2mg试剂五,80℃脱色30min,再加入0.5mL 提取液,冷却后,4000g,常温离心10min,取上清液测定。
测定步骤:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至480nm,蒸馏水调零。
2、样本测定,(在EP管中依次加入下列试剂):
试剂(μL) | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
样本 |
|
| 25 |
试剂一 |
| 25 |
|
蒸馏水 | 25 |
|
|
试剂二 | 15 | 15 | 15 |
混匀,沸水浴煮沸 5min 左右(盖紧,防止水分散失) | |||
试剂三 | 175 | 175 | 175 |
试剂四 | 50 | 50 | 50 |
混匀,沸水浴30min,冷却后取200μL至微量石英比色皿或96孔板中测定480nm 处光吸收值,空白管、标准管和测定管分别记为 A1、A2 和 A3。空白管和标准管只要做一管。