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分光光度法
产品内容:
提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体10mL×1瓶,-20℃保存;
试剂二:1000μg/mL蔗糖溶液10mL×1瓶,4℃保存;
试剂三:液体5mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:液体40mL×1瓶,4℃保存;
试剂五:液体10mL×1瓶,4℃保存;
产品简介:
蔗糖不仅是重要的光合产物,也是植物体内运输的主要物质,还是碳水化合物的贮存形式。蔗糖磷酸合成酶(SPS)以果糖-6-磷酸为受体,形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。
蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸,蔗糖磷酸与间苯二酚反应可呈现颜色变化,在480nm下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水
操作步骤:
一、测定样品提取:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
二、测定操作表:
按下表操作:
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
样本 | 30 | 30 |
|
|
蒸馏水 |
| 150 | 150 | 180 |
试剂一 | 150 |
|
|
|
试剂二 |
|
| 30 |
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混匀,25℃准确水浴10min | ||||
试剂三 | 50 | 50 | 50 | 50 |
沸水浴中煮沸10min左右(盖紧,以防止水分散失),冷却 | ||||
试剂四 | 700 | 700 | 700 | 700 |
试剂五 | 200 | 200 | 200 | 200 |
混匀,沸水浴30min,冷却后,在480nm下测定各管吸光值。标准管和测定管只要做一管。每个测定管需要设定一个对照管。