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细胞壁不溶性酸性转化酶（B-AI）测试盒
点击次数：206发布时间：2019/12/12 11:47:27
更新日期：2024/8/8 17:56:42
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶。根据*适pH，Ivr 分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。AI的*适 pH 为3～5。AI 分为可溶性 AI(S-AI)和细胞壁不溶性AI（B-AI）两种类型。B-AI存在于细胞间隙并结合在细胞壁上，主要参与韧皮部质外体卸载时蔗糖的分解，以维持库源之间蔗糖的浓度。
测定原理：
B-AI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范围内510nm光吸收增加速率与 B-AI 活性成正比。
自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液 1：液体 100mL×1 瓶，4℃保存;
提取液 2：液体 100mL×1 瓶，4℃保存;
试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存;
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入10mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂 4℃
保存;
试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液1体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液1），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min，弃上清，沉淀中加入1mL蒸馏水，充分震荡混匀，12000g 4℃离心10min，弃上清，沉淀中加入1mL提取液2充分混匀，4℃浸提过夜，12000g 4℃离心20min，取上清置冰上待测。
测定步骤和加样表：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至510nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）：
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 |
| 样本 | 50 | 50 |
| 试剂一 |
| 200 |
| 试剂二 | 200 |
|
| 混匀，37℃准确水浴30min后，95℃水浴10min（盖紧，以防水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变） | ||
| 试剂三 | 125 | 125 |
混匀，95℃水浴 10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀，取 200μL 至微量
石英比色皿或 96 孔板中 510nm 处记录各管吸光值 A 如果吸光值大于 2 可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数)，ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管设一个对照管。
