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紫外分光光度法
产品内容：
试剂一：液体×1瓶，－20℃保存。用前1 d取出置于4℃充分解冻后混匀。
试剂二：粉剂×1瓶。临用前加入550 μL试剂四，充分溶解。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入550 μL试剂四，充分溶解。
试剂四：液体×1瓶, 4℃保存。
试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入1100μL试剂四，充分溶解。
产品简介：
FAS是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A而生成长链脂肪酸。FAS普遍表达于各种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。
测定原理：
FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH生成长链脂肪酸和NADP+；NADPH在340nm有吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm 光吸收下降速率，计算FAS活性。
试验中所需的仪器和试剂：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1:5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。16000rpm，4℃离心40min，取上清置于冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500-1000:1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3分钟）；然后16000rpm，4℃离心40min，取上清置于冰上待测。
二、FAS测定操作：
1. 分光光度计预热30min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂四置于40℃水浴中预热30 min以上。
3. 空白管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸馏水、20μL试剂二、20μL试剂三、820μL试剂四和40μL试剂五，迅速混匀后于340nm处测定吸光值，记录第30s和90s时吸光值，分别记录为A1和A2。△A空=A1-A2。
4. 测定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、20μL试剂二、20μL试剂三、820μL试剂四和40μL试剂五，迅速混匀后于340nm处测定吸光值，记录第30s和90s时吸光值，分别记录为A1和A2。△A测=A3-A4。
