产品展示
优质供应
详细内容
微量法
测定意义：
LPS 又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS广泛的存在于各种生物中。血清中 LPS 的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。
测定原理：
LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算 LPS 活性。
自备仪器和用品：
研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪、甲苯、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，室温保存。
试剂三：液体×1 瓶，4℃保存。
标准品×1 瓶，10 µmol/mL 的标准溶液，室温保存。临用前加入3.168 mL甲苯，充分溶解。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。16000rpm，4℃离心 40min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后16000rpm，4℃，离心 40min，取上清置于冰上待测。
3. 血清: 直接检测。
LPS 测定操作：
1. 分光光度计预热30min以上，调节波长到710nm，蒸馏水调零。
2. 试剂一和试剂二置于37℃水浴预热 30min 以上。
3. 空白管：取1.5mL离心管，依次加入130μL试剂一 50μL试剂二和20μL蒸馏水，置于 37℃震荡反应 10 min；加入 300μL 甲苯，反复震荡混匀 10min，25℃，4000rpm 离心10 min；小心吸取上层溶液200μL，加入1.5mL离心管中，再加50μL试剂三，反复震荡5min；25℃，4000rpm 离心10 min，小心吸取上层溶液150μL，加入微量石英比色皿/96孔板，于710nm处测定吸光值。记为A空白管。
4. 测定管：取1.5mL离心管，依次加入130μL试剂一50μL试剂二和20μL上清液，置于37℃震荡反应10min；加入300μL甲苯，反复震荡混匀10min，25℃，4000rpm 离心10 min；小心吸取上层溶液200μL，加入1.5mL 离心管中，再加50μL试剂三，反复震荡5min；25℃，4000rpm 离心10min，小心吸取上层溶液150μL，加入微量石英比色皿/96 孔板，于710nm 处测定吸光值。记为A空白管。
5. 标准管：取标准品200μL，加入1.5mL离心管中，再加50μL试剂三，反复震荡5min；25℃，4000rpm 离心10min，小心吸取上层溶液150μL，加入微量石英比色皿/96 孔板，于710nm处测定吸光值。记为 A 空白管。
