产品展示
优质供应
详细内容
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
磷脂酶C（EC 3.1.4.3）是一种水解甘油磷酸酯C3位点甘油磷酸酯键的脂类水解酶，广泛存在于微生物及动植物的组织和细胞中，在细胞代谢、细胞传递、生长发育等方面具有重要作用。
测定原理
磷脂酶C催化水解NPPC产生对硝基苯酚，在410nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 55mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。
酶液提取
1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g 离心5min，取全部上清于4℃、100000g离心 30min，弃上清，取沉淀溶于1mL试剂一。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后于4℃，10000g 离心5min，取全部上清于4℃、100000g 离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL 试剂一。
3. 血清：直接测定。
测定操作
|
| 空白管 | 测定管 |
| 样品（μL） |
| 100 |
| 试剂一（μL） | 100 |
|
| 试剂二（μL） | 500 | 500 |
| 充分混匀，37℃反应 30min | ||
| 试剂三（μL） | 400 | 400 |
| 充分混匀，于1mL玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定410nm处吸光值，分别记为A空白管和 A 测定管，△A=A 测定管-A 空白管。 | ||
