产品展示
优质供应
详细内容
可见分光光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
SBE(EC 2.4.1.18)主要存在于植物中,是参与支链淀粉合成的关键酶,测定SBE活性在淀粉生物合成、优质农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义。
测定原理
淀粉和碘结合后在660nm有特征光吸收,SBE可切断支链淀粉侧支,从而降低了淀粉-碘复合物在660nm吸收值,一定时间内吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。
需自备的的仪器和用品
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水
试剂的组成和配制
提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×2 支,4℃保存;临用前每支加入 1mL 蒸馏水,充分溶解后备用;用不完的试剂 4℃保存;
试剂三:液体 25mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
粗酶液提取
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤
试剂名称(μL) | 对照管 | 测定管 |
95℃水浴 1min 后灭活的粗酶液 | 250 |
|
粗酶液 |
| 250 |
试剂一 | 320 | 320 |
试剂二 | 30 | 30 |
混匀,37℃准确保温 20 min,95℃水浴 1 min(盖紧防止水分散失),冷却 | ||
试剂三 | 500 | 500 |
试剂四 | 40 | 40 |
混匀,室温静置10min,用蒸馏水调零,660nm处读取各管吸光值。
注意:
1、可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行1min 95℃水浴处理。
2、试剂一如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混匀。