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详细内容
微量法
产品内容：
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体20mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存；
测定意义
HK（EC 2.7.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是葡萄糖分解过程中的个关键酶，催化葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途径的交叉点。
HK 催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH，NADPH 在340nm 有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一 样本的前处理
1、 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、 血清（浆）样品：直接检测。
二 测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定
（1） 在试剂二中加入18mL 试剂一充分溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；用不完的试剂4℃保存一周；
（2） 在试剂三中加入1mL 试剂一，充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存一周；
（3） 在微量石英比色皿或96 孔板中加入10μL 样本、10μL 试剂三和180μL 试剂二，混匀，立即记录340nm 处20s 时的吸光值A1 和 5min20s 后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。
注意：不同匀浆组织中HK 活力不一样，做正式试验之前请做1-2 只预试，若ΔA>0.5，则说明组织活力太高，必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液（计算公式中乘以相应稀释倍数），或缩短反应时间至2min,使ΔA<0.5，以提高检测灵敏度。
