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（3-Phosphoglycerate kinase，PGK）试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的关键酶，广泛存在于动植物和微生物体内，催化1，3-二磷酸甘油酸转变为3-磷酸甘油酸，产生1分子ATP，具有影响DNA复制和修补及刺激病毒RNA合成等生物学功能，广泛应用于药物靶标设计。
测定原理
3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP产生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在 3-磷酸甘油醛脱氢酶和NADH作用下产生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，340nm处的吸光度变化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿。
试剂组成和配制
提取液：液体50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体25mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加5mL蒸馏水充分溶解。
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加2.5mL蒸馏水充分溶解。
试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加2.5mL蒸馏水充分溶解。
试剂五：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加10mL蒸馏水充分溶解。
酶液提取
1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g，加入1mL
提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 10min，取上清置冰上待测。
2. 细胞：按照细胞数量（10 4 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议500
万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间 3min）；然后 4℃，10000g 离心 10min，取上清置冰上待测。
3. 液体：直接检测。
测定操作
1. 分光光度计预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2. 取1mL石英比色皿，依次加入500μL试剂一，100μL试剂二，50μL试剂三，50μL试剂四，200μL试剂五，100μL粗酶液，充分混匀，记录340nm 处10s的吸光值A1和310s的吸光值 A2，△A=A1-A2
