产品展示
优质供应
详细内容
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。
测定原理：
胃蛋白酶可催化血红蛋白水解，水解产物与福林试剂反应后显蓝色；一定范围内，其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入25 mL试剂二充分溶解。
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入25 mL蒸馏水充分溶解。
试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入30 mL蒸馏水充分溶解。
试剂六：液体×1 瓶，4℃保存。
标准品：液体×1 支，0.5μmol/mL 酪氨酸标准溶液浓度4℃保存。
粗酶液提取：
组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，即粗酶液。
测定步骤：
1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 580 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三和试剂四置于 37℃水浴预热 30min。
3. 标准管：取EP管，加入100μL 标准品，200μL试剂二，600μL试剂五，100μL试剂六，混匀后室温静置20min，于580 nm测光吸收，记为A标准管。
4. 空白管：取EP管，加入100μL蒸馏水，200μL试剂二，600μL试剂五，100μL试剂六，混匀后室温静置20min，于580nm 测光吸收，记为A空白管。
5. 对照管：取EP管，加入500μL试剂三，置于37℃水浴保温10min；加入500μL试剂四，盖紧后摇匀1min；加入100μL粗酶液，混匀后8000g 4℃离心10分钟；取上清液100μL，加入新EP管，再加入200μL 试剂二，600μL 试剂五，100μL 试剂六，混匀后室温静置 20min，于 580 nm 测光吸收，记为 A 对照管。
6. 测定管：取EP管，加入100μL粗酶液，500μL试剂三，置于37℃水浴保温10min；加入500μL试剂四，盖紧后摇匀1min；8000g 4℃离心10分钟；取上清液100μL，加入新EP管，再加入200μL试剂二，600μL试剂五，100μL试剂六，混匀后室温静置 20min，于580 nm测光吸收，记为A测定管。
注意：空白管和标准管只需要测定一次。
