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微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
糜蛋白酶，又称胰凝乳蛋白酶，是胰腺分泌的一种蛋白水解酶，能迅速分解变性蛋白质。糜蛋白酶的功能与胰蛋白酶相似，但是具有分解能力强、毒性低和不良反应小等优点。临床上糜蛋白酶用于痰液稀化，对脓性和非脓性痰液均有效；也用于创伤或手术后伤口愈合，如白内障摘除。
测定原理：
糜蛋白酶催化ATEE水解，产物在237nm有特征光吸收；通过测定237nm光吸收增加速率，来计算糜蛋白酶活性。
自备仪器和用品：
台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV 板)、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入20mL蒸馏水充分溶解。
粗酶液提取：
组织样品：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。
测定步骤：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到237nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二置于37℃水浴中保温30min。
3. 空白管：取微量石英比色皿/96孔板，加入20μL试剂一，200μL试剂二，混匀于237nm测定4min内吸光值变化，记为△A 空白管。（从吸光值稳定增加开始计时）
4. 测定管：取微量石英比色皿/96孔板，加入20μL 粗酶液，200μL试剂二，混匀于237nm测定4min内吸光值变化，记为△A测定管。（从吸光值稳定增加开始计时）
注意：空白管只需要测定一次。
