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可见分光光度法
正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
PDH（EC 4.1.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是丙酮酸脱氢酶复合体(PDHC)催化丙酮酸氧化脱羧的限速酶，催化丙酮酸脱梭生成羟乙基-TPP，把糖酵解和三羧酸循环连接起来。
测定原理
PDH 催化丙酮酸脱氢，同时还原 2,6-二氯酚靛酚（2,6-DCPIP），从而导致 600nm 光吸收的减少。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
试剂一：50mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂二：10mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂三：1mL×1 支，-20℃保存；
试剂四：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂五：粉剂×1 支，4℃保存；
试剂六：粉剂×1 支，4℃保存；
试剂七：粉剂×1 支，4℃保存；
试剂八：粉剂×1 支，4℃保存;
工作液的配制：临用前把试剂五、试剂六、试剂七和试剂八转移到试剂四中混合溶解待用；
用不完的试剂 4℃保存一周。
样本的前处理
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
1、称取约0.1g组织或收集500万细菌或细胞，加入1mL试剂一和10uL试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、将匀浆600g，4℃离心 5min。
3、弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。
4、上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的 PDH（此步可选做）。
5、 在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL试剂三，超声波破碎（冰浴，功率 20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体PDH活性测定。
测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至605nm处，蒸馏水调零。
2、工作液于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）中孵育 5min。
3、在1mL玻璃比色皿中加入50μL样本和900μL工作液，混匀，立即记录 605nm 处初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
