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线粒体异柠檬酸脱氢酶（ICDHm)测试盒
点击次数：201发布时间：2019/12/12 14:26:03
更新日期：2024/8/8 17:56:42
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
紫外分光光度法
正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
ICDHm（EC 1.1.1.41）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，在三羧酸循中催化异柠檬酸生成α-酮戊二酸，同时将NAD+还原NADH，是三羧酸循环的限速酶，其催化的反应是细胞 NADH 主要来源。
测定原理
ICDHm催化 NAD+还原生成NADH，导致340nm处光吸收上升。
需自备的仪器和用品
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
试剂一：50mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂二：10mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂三：1mL×1 支，-20℃保存；
试剂四：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂五：粉剂×1 支，4℃保存；
试剂六：粉剂×1 支，-20℃保存；
试剂七：粉剂×1 支，-20℃保存; 临用前加入3mL蒸馏水充分混匀待用，现配现用。
工作液的配制：临用前把试剂五、试剂六转移到试剂四中混合溶解待用；用不完的试剂 4℃
保存一周；
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
1、 称取约0.1g组织或收集500万细菌或细胞，加入1mL试剂一和10uL试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、 将匀浆600g，4℃离心 5min。
3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。
4、 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的 ICDHm（此步可选做）。
5、 在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体 ICDHm活性测定。
测定步骤
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm处，蒸馏水调零。
2、工作液于37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）孵育 5min。
3、在1mL石英比色皿中依次加入60μL试剂七、80μL样本和1mL工作液，混匀，立即记
录340nm处20s时的吸光值A1和2min20s时的吸光值A2，计算 ΔA=A2-A1。
