产品展示
优质供应
详细内容
可见分光光度法
正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定
产品内容:
提取液:液体30mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体5mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂二:液体5mL×1 瓶, 4℃保存;
试剂三:液体50 mL×1 瓶,4℃保存;
产品说明:
GOT( 2.6.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化可逆转氨基反应,是氨基酸代谢的重要酶。此外,GOT 在心肌细胞中含量,临床上一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查。肝脏损害时其血清浓度也可升高。
GOT 催化α-同戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应,生成谷氨酸和草酰乙酸,草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸;丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙,在碱性条件下显棕红色;测定505nm 吸光度的变化,即可计算GOT 酶活力。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样品测定的准备
1、 细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30 次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、 血清(浆)样品:直接检测。
二、测定操作表
1、 分光光度计预热30min 以上,调节波长至505nm,蒸馏水调零。
2、 在EP 管中加入下列试剂
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 |
待测样本 | 20 |
|
试剂一 | 100 | 100 |
混匀后,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热30min | ||
试剂二 | 100 | 100 |
待测样本 |
| 20 |
混匀后,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)准确水浴20min | ||
试剂三 | 1000 | 1000 |
混匀,室温放置10min,在505nm 波长处,测各管吸光度。每个测定管需设一个对照管。