产品展示
优质供应
详细内容
可见分光光度法
产品内容：
组织提取液：6mol/L盐酸，自备。浓盐酸：H2O（V/V）= 1:1，室温保存。
细胞提取液：液体100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1 瓶，4 ℃避光保存。
试剂二：液体10mL×1 瓶，4 ℃，用前加入高氯酸2.1ml（自备）
产品说明：
HYP 是机体胶原蛋白主要成分，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。
样品经酸水解产生游离的HYP，进一步被氯胺T 氧化，氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应，产生红色化合物，在560nm 处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm 吸光值，可计算HYP 含量。
自备实验用品及仪器：
天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、6mol/L盐酸、高氯酸和蒸馏水。
操作步骤：
一、 羟脯氨酸提取
1. 组织称取约0.5g 样品于玻璃管，加入5mL 的组织提取液，置于110℃烘箱，水解6至12 小时，16000rpm，25℃，离心20min，用提取液定容至5mL，取上清待测。
2. 细胞：取500 万个细胞，加入2mL 的细胞提取液，于高压消毒器中15 磅保持30min，自然降压后待测。
二、 测定操作表
|
| 对照管 | 测定管 |
| 样本（mL） |
| 0.2 |
| 试剂一 | 0.2 | 0.2 |
| 混匀，室温静置20min | ||
| 试剂二 | 0.2 | 0.2 |
| H2O | 0.6 | 0.4 |
| 混匀，60℃，20min，取出后室温静置15 min，对照管调零，1mL 玻璃比色皿，测定A560。 | ||
三、 羟脯氨酸含量计算公式
标准曲线：y=64.875x+ 0.0251，R2=0.9991
（1） 按组织计算
HYP 含量（mg/g）=（A560-0.0251）÷ 64.875×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)
= 0.385×（A560-0.0251）÷W
（2） 按细胞数量计算
HYP含量（mg/104 cell）=（A560-0.0251）÷ 64.875×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量(万个)
= 0.154×（A560-0.0251）÷细胞数量(万个)
V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应中样品体积，0.2mL；V 样总：加入提取液体积，mL；W：样品质量，g。
注意事项：
1、 OD 值大于0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
2、 试剂有一定的毒性，请操作时做好防护措施，防止吸入或与皮肤接触。
