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微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
AchE属于丝氨酸水解酶，广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE催化乙酰胆碱（Ach）水解，在神经传导调节中起重要作用。
测定原理：
AchE催化 Ach水解生成胆碱，胆碱与二硫对硝基苯甲酸（DTNB）作用生成 5-巯基-硝基苯甲酸（TNB）；TNB在412nm处有吸收峰，通过测定412nm吸光度增加速率，计算AchE活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 支，4℃保存。 临用前加入1.3 mL试剂二，充分震荡溶解。
试剂四：粉剂×1 支，4℃保存。 临用前加入1.3 mL试剂二，充分震荡溶解。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清液待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。
测定操作：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到412 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二置于37℃水浴中预热30min。
3. 空白管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入20μL蒸馏水、160μL试剂二、10μL试剂三和10μL试剂四，迅速混匀，于412nm处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s 吸光值记为A2。△A空白管=A2－A1
4. 测定管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入20μL上清液、160μL试剂二、10μL试剂三和10μL试剂四，迅速混匀，于412nm 处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A3，第190s吸光值记为A4。△A测定管=A4-A3
注意：空白管只需测定一次。
