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分光光度法
产品内容：
酸性提取液：液体60mL×1 瓶，4℃保存；
碱性提取液：液体60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1支，4℃保存；临用前加2mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；
试剂二：液体3mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加300μL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存一周；
试剂四：液体10mL×1 瓶，4℃保存；
试剂五：液体50mL×1 瓶，4℃保存；
标准液：液体10mL×1 瓶，1μmol/mLATP 标准液，4℃保存；
产品说明：
ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ATP含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。肌酸激酶催化肌酸和ATP 反应生成磷酸肌酸，可在700nm 下用磷钼酸比色法检测磷酸肌酸含量，以此反应ATP 含量。
自备仪器和用品：
分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL 石英比色皿、研钵和蒸馏水。
操作步骤：
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
一、ATP 提取：
1、 血清（浆）中ATP 的提取：按照血清（浆）体积（mL）：酸性提取液体积（mL）为1：5~10 的比例（建议取约0.1mL 血清（浆），加入1mL 酸性提取液），进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min；取上清液至另一EP 管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，8000g4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。
2、 组织中ATP 的提取：按照组织质量（g）：酸性提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL酸性提取液），进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清至另一EP 管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，8000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。
3、 细胞或细菌中ATP 的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104 个）：酸性提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 酸性提取液），超声波破碎1min（冰浴，强度20％或200W，超声2s，停1s），8000g 4 ℃离心10min；取上清液至另一EP 管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。
二、测定步骤：
1、分光光度计预热30 min 以上，调节波长到700nm，蒸馏水调零。
2、显色剂的配制：临用前请根据拟用显色剂体积（样本数×0.87mL），按试剂四(mL)：试剂五（mL）=1：5 的比例配制。用多少配多少。
3、样本测定：
| 试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
| 样本 | 30 | 30 |
|
|
| 标准液 |
|
| 30 | 30 |
| 试剂一 | 60 |
| 60 |
|
| 试剂二 | 30 | 30 | 30 | 30 |
| 试剂三 | 10 |
| 10 |
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| 蒸馏水 |
| 70 |
| 70 |
| 充分混匀，37℃准确水浴30min | ||||
| 显色剂 | 870 | 870 | 870 | 870 |
| 37℃水浴20min 后，700nm 下测定各管吸光值 | ||||
注意：空白管和标准管通常只需要各做一个。每个测定管设一个对照管。
