产品展示
优质供应
详细内容
紫外分光光度法
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
GDH（EC 1.4.1.2）广泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同参与谷氨酸的合成，在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。
测定原理：
GDH催化NH4+ 、α-酮戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD+，引起340nm吸光度下降。通过测定340nm吸光度的下降速率，计算GDH活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 支，4℃保存；
试剂三：粉剂×1 支，4℃保存；
试剂四：粉剂×1 支，-20℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定
（1）工作液的配制：临用前将试剂二、三、四转移到试剂一中混合溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；现配现用；
（2）取 0.05mL样本和1mL工作液于1mL比色皿中，混匀，加工作液的同时开始计时，在340 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1和5分20秒时的吸光度A2，计算 ΔA=A1-A2。
