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分光光度法
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
硝态氮是植物*主要的氮源。植物体内硝态氮含量反映了土壤中硝态氮的供应情况,可作为土壤氮肥的指标。测定植物体内的硝态氮含量,不仅能够反映出植物的氮素营养情况,而且
对鉴定蔬菜和以植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
测定原理
在浓酸条件下,NO3-与水杨酸反应,生成硝基水杨酸,硝基水杨酸在碱性条件下(PH>12)呈黄色,在一定范围内,其颜色深浅与含量成正比,可比色测定计算得硝态氮含量 。
自备实验用品及仪器
蒸馏水、天平、常温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
试剂一:粉剂×2瓶,4℃避光保存。临用前根据用量每瓶加2mL浓硫酸充分溶解。
试剂二:液体100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 支,4℃保存。
样本处理
按照质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL 蒸馏水)加入蒸馏水,室温匀浆后置于90℃恒温水浴锅中浸提30min,期间不断晃动或者置于 90℃恒温摇床中振荡提取 30min,待冷却后于 25℃,12000g 离心 15min,取上清待测。(深色植物匀浆后加入约3mg试剂三后再提取)
测定操作表
| 空白管 | 测定管 |
样本(μL) |
| 20 |
蒸馏水(μL) | 20 |
|
试剂一(μL) | 80 | 80 |
充分混匀,25℃静置 30min | ||
试剂二(μL) | 1900 | 1900 |
混匀,25℃静置5min,取1mL于1mL玻璃比色皿中测定410nm处吸光值 A, △A=A 测定管-A 空白管 |
注意:空白管只需测定一次。