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可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
硝酸还原酶（NiR）是一类能催化亚硝酸盐还原的酶，广泛存在于微生物及植物体内，是自然界氮循环过程中的关键酶，可以将亚硝酸盐降解为NO或NH3，从而减少环境中亚硝态氮的积累，降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。
测定原理
亚硝酸还原酶可将NO2-还原为 NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2-减少，即540nm处吸光值的变化可反应亚硝酸还原酶的活性。
需自备的仪器和用品
天平、研钵、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1mL 玻璃比色皿。
试剂的组成和配制
试剂一：液体 80mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 3mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 3mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。 临用前加 2mL 蒸馏水溶解。
试剂五：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。 临用前加 8mL 蒸馏水溶解。
显色剂 A：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
显色剂 B：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
临用前，根据用量将显色剂A和显色剂B按 按 1:1 的比例混合。
酶液提取
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2．细菌、真菌：按照细胞数量（10 4 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。
测定操作表
|
| 空白管 | 对照管 | 测定管 |
| 试剂一（μL） | 700 | 600 | 550 |
| 试剂二（μL） | 60 | 60 | 60 |
| 试剂三（μL） | 50 |
| 50 |
| 试剂四（μL） | 30 | 30 | 30 |
| 试剂五（μL） | 160 | 160 | 160 |
| 样品（μL） |
| 150 | 150 |
| 混匀后，37℃反应 1h | |||
| 显色剂（μL） | 200 | 200 | 200 |
| 充分混匀，25℃静置显色 10min，用蒸馏水调零，于 1mL 玻璃比色皿中 测定 540nm 各管吸光值，分别记为 A 空白管、A 对照管、A 测定管。 | |||
注意：空白管只需测定一次。
