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紫外分光光度法
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
ICDHc（EC 1.1.1.42）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化异柠檬酸脱氢脱羧生成 α-酮戊二酸，同时还原 NADP+生成 NADPH。ICDHc 是细胞质中除了磷酸戊糖途径外又一种 NADPH 重要来源，在逆境中该酶活性通常会发生显著变化。
测定原理：
利用 ICDHc 催化 NADP+还原成 NADPH 反应，在 340 nm下测定 NADPH 浓度的增加。
所需的仪器和用品:
紫外分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 50 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 支，4℃保存；用时加 550μL 蒸馏水充分溶解备用；溶解后 4℃可保存一周。
试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存；用时加 550μL 蒸馏水充分溶解备用；现配现用。
样本的前处理：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、 将试剂一置于 37℃(哺乳动物)或 25℃（其它物种）水浴中预热 10min 左右。
3、 操作表：
| 试剂名称（μL） | 测定管 |
| 试剂一 | 750 |
| 试剂二 | 10 |
| 试剂三 | 10 |
| 样本 | 30 |
将上述试剂按顺序加入 1 mL 石英比色皿中，加样本的同时开始计时；混匀，在 340nm 波长下记录20s时的初始吸光度 A1和2min 20s时的吸光度A2，计算 ΔA=A2-A1。
注意事项：
1、 若 A2-A1 大于 0.5，需将酶液用提取液稀释，使 A2-A1 小于 0.5，可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。
2、 若 A2-A1 小于 0.005，可延长反应时间到 5min 或 10min。
