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紫外分光光度法
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
ME广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中，尤其在植物组织中活性较高。ME催化苹果酸氧化脱羧的可逆反应，产生丙酮酸和 CO2 ，以及伴随NAD(P)+的还原反应，是苹果酸代谢的关键酶。ME活性与生物合成和抗氧化密切相关。近年来植物 ME 活性测定较多，已经成为抗氧化研究的热点。根据辅酶专一性和对底物特异性的不同，可将ME分为NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40)。
测定原理：
NADP-ME 催化 NADP+还原成 NADPH，在340nm下测定NADPH 增加速率。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存。；
试剂一：液体 40mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1 支，4℃保存；用时加2mL蒸馏水充分溶解备用；溶解后4℃可保存一周；
试剂四：粉剂×1 支，-20℃保存；用时加1mL蒸馏水充分溶解备用；现配现用；
样本的前处理：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、将试剂一、二、三和四置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。
如果一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三和四按下表比例配成混合液后置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上（混合液现配现用）。
3、 操作表：
| 试剂名称（μL） | 测定管 |
| 试剂一 | 600 |
| 试剂二 | 225 |
| 试剂三 | 30 |
| 试剂四 | 15 |
| 样本 | 30 |
将上述试剂按顺序加 1mL石英比色皿中，混匀，立即记录340 nm波长下初始吸光度 A1和反应 1min 后的吸光度 A2，计算 ΔA=A2-A1。
注意：如果 ΔA＜0.005，可将反应时间延长到2分钟或5分钟。
