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紫外分光光度法
注意:正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
产品内容:
提取液:液体60mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂1 瓶,4℃避光保存,使用前加15mL 蒸馏水溶解。
试剂二:液体15mL×1 瓶,4℃保存。
工作液:临用前根据用量将试剂一和试剂二以1:1 混合。使用前37℃温育2min。
产品说明:
CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中,能可逆地催化肌酸与ATP 之间的转磷酰基反应,在能量运转、肌肉收缩和ATP 再生中有重要作用,是临床诊断心脑疾病的一个重要指标。 CK 催化磷酸肌酸和ADP 生成肌酸和ATP,己糖激酶催化ATP 与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖, 6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH,导致340nm 光吸收值增加。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿和蒸馏水。
操作步骤:
一、 粗酶液提取
1. 组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心15min,取上清,置冰上待测。
2. 血清样本:直接测定。
二、 测定操作表
| 空白管 | 测定管 |
酶液(μ L) |
| 200 |
工作液(μ L) | 500 | 500 |
H2O(μ L) | 500 | 300 |
混匀,于1mL 石英比色皿,对照管调零,测定340nm 的初始值A1,测定完立即放入37℃水浴,准确计时,分别测定1min,2min,3min 时的吸光值A2,计算时取平均值,△A= A2-A1。 |
注意:空白管只需测定一次。