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硫氧还蛋白氧化还原酶（TrxR）测试盒
点击次数：138发布时间：2019/12/12 16:02:24
更新日期：2024/8/8 17:56:42
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
活性测定试剂盒说明书
可见分光光度法
产品说明：
TrxR 是一种NADPH 依赖的包含FAD 结构域的二聚体硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员，与硫氧还蛋白以及NADPH 共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR 与GR 活性类似，催化GSSG 还原生成GSH，是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶。
TrxR 催化NADPH 还原DTNB 生成TNB 和NADP+，TNB 在412 nm 有特征吸收峰，通过测定412nm 波长处TNB 的增加速率，即可计算TrxR 活性。
自备仪器和用品：
可见分分光光度计、低温离心机、可调节移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
产品内容：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入5 mL 蒸馏水溶解。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入5 mL 蒸馏水溶解。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待检测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 s，间隔7s，总时间3min），然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
二、TrxR 测定操作：
1. 分分光光度计预热30 min 后，调节波长到412nm，用蒸馏水调零。
2. 试剂一在25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）预热30min。
3. 空白管：取1mL 玻璃比色皿，加入100μL 试剂二，100μL 试剂三，800μL 试剂一，迅速混匀后于412 nm 测定10 s 和310 s 吸光度，记为A1 和A2。△A 空白管=A2-A1。
4. 测定管：取1mL 玻璃比色皿，加入100μL 试剂二，100μL 试剂三，700μL 试剂一，100μL上清液，迅速混匀后于412 nm 测定10 s 和310 s 吸光度，记为A3 和A4。△A 测定管=A4-A3。
