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试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
DHAR存在于细胞质、线粒体和叶绿体中。DHAR 催化GSH还原DHA生成 AsA 和GSSG，调控细胞 AsA/DHA 比值，是抗坏血酸-谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶。提高植物体内的DHAR 活性，可提高植物食品中AsA含量，进而提高植物食品的营养品质。
测定原理：
DHAR催化GSH还原DHA生成AsA，通过测定DHA减少速率，计算DHAR活性。
实验中所需仪器及设备：
研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体 50 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 35 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶（棕色），4℃保存。临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解。
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解。
粗酶液提取：
1. 按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议
500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间 3min）；8000g 4℃离心 20min，取上清液置冰上混匀待测。
3. 血清等液体：直接测定。
DHAR 测定操作：
1. 分光光度计预热30min，调节波长到265nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴锅中预热 30 min。
3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、100μL试剂三、100μL试剂四和700μL试剂二，迅速混匀后于265nm比色，记录30s和150s的吸光值 A1和A2，△A=A2-A1。
