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可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志，其含量高低表明蛋白质氧化损伤程度的大小，是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。
测定原理
羰基与 2,4-二硝基苯肼反应生成红色 2,4-二硝基苯腙，在370nm 处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、恒温水浴锅、低温离心机、漩涡震荡仪、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿和蒸馏水，无水乙醇，乙酸乙酯。
试剂组成和配制
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂 0.1g×5支，4℃避光保存。（使用前根据样品数，每支加1mL 水溶解，每支为10 个样品用量）
试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。
试剂五：根据测定样品量，将乙酸乙酯和无水乙醇等体积混合。
试剂六：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
样品处理
1. 组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，于4℃，4000g 离心10min，取上清，加入 0.1mL试剂一，室温放置 10min，4℃，10000g 离心 10min，取上清待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体样本：直接测定。
测定步骤和操作表
|
| 对照管 | 测定管 |
| 样品（mL） | 0.2 | 0.2 |
| 试剂二（mL） |
| 0.4 |
| 试剂三（mL） | 0.4 |
|
| 混匀，37℃避光反应 1h | ||
| 试剂四（mL） | 0.5 | 0.5 |
| 静置 5min，4℃，12000rpm 离心 15min，弃上清，留沉淀 | ||
| 试剂五（mL） | 1.0 | 1.0 |
| 漩涡混匀，4℃，12000rpm 离心 10min，弃上清，留沉淀 | ||
| 试剂五（mL） | 1.0 | 1.0 |
| 漩涡混匀，4℃，12000rpm 离心 10min，弃上清，留沉淀 | ||
| 试剂五（mL） | 1.0 | 1.0 |
| 漩涡混匀，4℃，12000rpm 离心 10min，弃上清，留沉淀 | ||
| 试剂六（mL） | 1.0 | 1.0 |
| 漩涡混匀，37℃温育 15min，沉淀全部溶解后，4℃，12000rpm 离心 15min，取上清，1mL 玻璃比色皿，试剂六调零，分别记录370nm对照管和测定管在的吸光值，ΔA370 =A370 测定管－A370对照管 | ||
