产品展示
优质供应
详细内容
可见分光光度法
注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物(肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等)、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛,其活性与核酸和蛋白合成密切相关,能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤
程度。
测定原理
DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢,外源添加过量的辣根过氧化物酶,催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成氧化型邻联茴香胺,在460nm 处有特征吸收峰,通过测定该波长吸光度增加速率,计算 DAO 活性。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液:液体 80mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 0.5mL×1 支,4℃保存。
试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
粗酶液提取
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 20min,取上清,置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建
议 500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体:直接测定。
测定操作表
| 对照管 | 测定管 |
粗酶液(μL) | 250 | 250 |
提取液(μL) | 640 | 540 |
试剂一(μL) | 10 | 10 |
试剂二(μL) | 100 | 100 |
试剂三(μL) |
| 100 |
混匀,37℃水浴 30min,1mL 玻璃比色皿,对照管调零,测定 A 460 |