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微量法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
铜蓝蛋白是血浆的含铜蛋白，有运输铜的功能，同时具有氧化酶的活性，是细胞外液重要的抗氧化剂。
测定原理:
铜蓝蛋白催化 3,3’,5,5’-四甲基联苯胺生成蓝色产物，在645nm处有特征吸收峰，依此可得铜蓝蛋白活性。
自备实验用品及仪器:
天平、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 7mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃避光保存。（使用前 37℃预热）
测定操作表:
1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至645nm，蒸馏水调零。
2、操作表
|
| 空白管 | 测定管 |
| 样品（µL） | 30 | 30 |
| 试剂一（µL） | 90 | 90 |
| 试剂二（µL） | 60 |
|
| 混匀，37℃预热 5min | ||
| 试剂三（µL） | 120 | 120 |
| 混匀，37℃反应 30min | ||
| 试剂二（µL） |
| 60 |
| 混匀，25℃室温放置5min，取200µL于微量石英比色皿/96孔板中，测定645nm处吸光值。 ΔA=A测定-A空白。 | ||
计算公式:
酶活定义:37℃条件下，每分钟每毫升样品与底物作用吸光度升高0.01为一个酶活单位。
Cp 活力（U/mL）=ΔA×V 反总÷0.01÷V 样÷T = 33.33×ΔA
V 样：0.03 mL；V 反总：0.3 mL；T：反应时间，30min
注意事项:
试剂二和试剂三有一定的毒性和刺激性，请操作时做好防护措施。
