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试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液,细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液
及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。
测定原理
在酸性环境下,物质还原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ的能力反映了其总抗氧化能力。
自备实验用品
可见分光光度计、恒温水浴锅、低温离心机、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液:液体 60mL×1 瓶,使用前预冷。
试剂一:液体 50mL×1 瓶,避光保存。
试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体 5mL×1 瓶,避光保存。
样品的制备
(1) 血清、血浆、唾液或尿液样品
血浆(制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝,不宜使用 EDTA 抗凝)4℃,5000rpm 离心10min,取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定,也可以-80℃冻存(不宜超30 d)后再测定。
(2) 组织样品
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
(3) 细胞样品
按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入1mL 提取液),冰浴超声波破碎(功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
操作步骤
混合液(现配现用):将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1 的比例混合,使用前预温至 37℃ 。
| 空白管 | 测定管 |
混合液(μL) | 900 | 900 |
样品(μL) |
| 30 |
双蒸水(μL) | 120 | 90 |
充分混匀,反应10min,双蒸水调零,1mL玻璃比色皿,测定593nm处吸光值,△A= A测定 -A空白 |
注意:空白管只需测定一次。