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可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子，造成细胞结构和功能受损，进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标，在抗氧化类
保健品和药品研究中得到广泛应用。
测定原理
H2O2/ Fe2+通过Fenton 反应产生羟自由基，将邻二氮菲- Fe2+水溶液中 Fe2+氧化为Fe3+，导致 536nm吸光度下降，样品对536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了样品清除羟自由基的能力。
自备实验用品
可见分光光度计、恒温水浴锅、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液：液体 50 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 8 mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体 20 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 5 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体 5 mL×1 瓶，4℃保存。
样品的制备
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2. 血清、果汁等液体样品可直接测定。
3. 提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如 5 mg/mL。
操作步骤
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| 空白管 | 对照管 | 测定管 |
| 试剂一（µL） | 150 | 150 | 150 |
| 试剂二（µL） | 400 | 400 | 400 |
| 试剂三（µL） | 100 | 100 | 100 |
| 立即混匀，防止局部颜色过浓 | |||
| 样品（µL） |
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| 250 |
| 试剂四（µL） |
| 100 | 100 |
| H2O（µL） | 350 | 250 |
|
| 混匀、37℃，60min，双蒸水调零，测定 OD 536 | |||
注意：空白管和标准管只需测定一次。
计算公式
羟自由基清除率 D% =（OD测定管- OD对照管）÷（OD空白管-OD对照管）×100%
注意事项
为了比较不同样品羟自由基清除能力，对于同一批样品必须加入等量的样品，血清、组织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积，提取物（或者药物）配制成同样浓度。
