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微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质，而且参与活性氧清除，后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和 GSH含量，能够间接测定蛋白质巯基含量。
测定原理：
巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在412nm处有吸收峰。
自备实验用品：
天平、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 1 mL×1 管，4℃避光保存。
样品的制备：
1. 按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后 8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2. 血清，培养液：直接测定。
操作步骤：
1、分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 412nm，蒸馏水调零。
2、操作表
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| 对照管 | 测定管 |
| 样品（μL） | 40 | 40 |
| 试剂一（μL） | 150 | 150 |
| 试剂二（μL） |
| 10 |
| H2O（μL） | 10 |
|
| 混匀，25℃静置10min，于微量石英比色皿/96孔板，测定412nm吸光值。ΔA=A测定-A对照。 | ||
