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柠檬酸裂解酶（isocitrate lyase，ICL）试剂盒说明书
紫外分光光度法
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
产品内容 ：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×3 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入5mL蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂四：粉剂×3 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入5mL蒸馏水，充分混匀待用；现配现用；
试剂五：液体×2 支，4℃保存；临用前每支加入560μL蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂仍 4℃保存；
试剂六：粉剂×3 瓶，4℃保存；临用前每瓶加入5mL蒸馏水，充分混匀待用。用不完的试剂-20℃保存；
产品说明：
ICL（EC4.1.3.1）主要存在于植物和微生物中，油料作物种子在萌发过程中，通过乙醛酸循环及其他过程将脂肪转变成碳水化合物。ICL 是乙醛酸循环的关键酶。
ICL 催化异柠檬酸降解为乙醛酸和琥珀酸，乙醛酸和 NADH 在 LDH 的作用下生成乙醇和NAD，NADH 在 340nm 下有特征吸收峰，监测 340nm 吸光度的减小速率可间接反应 ICL 活性。
需自备的仪器和用品 ：
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
操作步骤：
一、样本的前处理：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10 4个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；15000g 4℃离心 10mi n，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤：
| 试剂 | 测定管 |
| 试剂一（μL） | 300 |
| 试剂二（μL） | 250 |
| 试剂三（μL） | 300 |
| 试剂四（μL） | 300 |
| 试剂五（μL） | 20 |
| 样本（μL） | 50 |
| 混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min | |
| 试剂六（μL） | 300 |
将上述试剂按顺序加入 1 mL 玻璃比色皿中，加试剂六的同时开始计时，在 340nm 波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1 和 2 分 20 秒时的吸光度 A2，计算ΔA =A1-A2。
注意：若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三、四、五和样本按比例配成混合液，在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min 以上，测定时加入 1220µL 混合液和 300µL试剂六测定。
