产品展示
优质供应
详细内容
微量法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
锰过氧化物酶(EC1.11.1.13)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,主要存在于担子菌中,属于木质素降解酶系,能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物,叠氮化合物、
DTT,多环芳烃等。
测定原理
锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下,将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚,在465nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
试剂一:液体 110mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 2mL×1 支,4℃保存。
试剂三:液体 4mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体 2mL×1 支,4℃保存。
酶液提取
1. 组织:按照质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL试剂一)加入试剂一,冰浴匀浆后于4℃,10000g 离心10min,取上清置于冰上待测。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间 3min);然后 4℃,10000g 离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 培养液或其它液体:直接检测。
测定操作
| 对照管 | 测定管 |
试剂一(μL) | 120 | 100 |
试剂二(μL) |
| 20 |
试剂三(μL) | 40 | 40 |
样品(μL) | 20 | 20 |
试剂四(μL) | 20 | 20 |
充分混匀,于30℃反应10min,于微量石英比色皿/96孔板,测定465nm处吸光值,记为A对照管和A测定管,△A=A测定管-A对照管 |