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磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）测试盒
点击次数：274发布时间：2019/12/13 10:29:04
更新日期：2024/8/8 17:56:42
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
紫外分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
PEPCK（ EC4.1.1.32）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，催化草酰乙酸转化为磷酸烯醇式丙酮酸，是调节糖异生途径的关键酶。
测定原理：
PEPCK催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PEPCK活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 45 mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂二：液体×1 支，4℃保存；
试剂三：粉剂×1 支， -20℃保存；
试剂四：粉剂×1 支，-20℃保存；
样本的前处理：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三转移到试剂一中混合溶解待用；现配现用；
试剂四的配制：临用前加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保存一周；
2、将工作液和试剂四置于37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热5分钟。
3、在1mL石英比色皿中加入50μL样本、50μL试剂四和900μL工作液，立即混匀，记录340nm 处初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，计算 ΔA=A1-A2。
注意：在该试剂盒中，若ΔA大于0.1，需将样本用提取液稀释适当倍数后测定，使ΔA小于0.1可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。
